西里伯斯青鳉tyr和slc24a5的克隆及表达分析

作者：马元; 仲颖; 郭婧; 李名友^*

来源：水生生物学报, 2022, 46(03): 282-291.

• tyr
• slc24a5
• 黑色素
• 基因表达
• 西里伯斯青鳉

为了探究黑色素合成相关基因酪氨酸酶(Tyrosinase, tyr)和溶质载体24家族成员5(Solute carrier family24, member 5, slc24a5)在西里伯斯青鳉(Oryzias celebensis)中的表达特征,研究采用RACEs(Rapid Amplication of cDNA Ends)技术从西里伯斯青鳉精巢中克隆了tyr(Octyr)和slc24a5(Ocslc24a5)的全长c DNA(Complementary DNA)。Octyr的cDNA全长为2249 bp,开放阅读框长1635 bp,编码545个氨基酸; Ocslc24a5的cDNA全长为2065 bp,开放阅读框长1542 bp,编码514个氨基酸。氨基酸多重比对和系统发育树分析发现, Octyr和Ocslc24a5氨基酸序列非常保守,均与日本青鳉同源性较高。通过PCR克隆了Octyr和Ocslc24a5的基因组DNA序列,结果发现, Octyr开放阅读框跨越5个外显子, Ocslc24a5开放阅读框跨越8个外显子。荧光定量PCR(qRT-PCR)分析了Octyr和Ocslc24a5在不同组织和不同胚胎发育时期的相对表达水平,结果显示, Octyr和Ocslc24a5在脑、眼、肝、肾、肠、皮肤、卵巢和精巢中均有表达,且均在精巢中表达量最高,其次是眼和脑; Octyr和Ocslc24a5在胚胎发育不同时期均有表达,在胚胎发育到第7天时表达水平均达到最高。利用0.25 mmol/L苯基硫脲(PTU)抑制胚胎黑色素沉积后进行整体原位杂交(WISH)发现, Octyr和Ocslc24a5的表达模式相似,在囊胚期, Octyr和Ocslc24a5在所有胚胎细胞中均有表达;在神经胚期, Octyr和Ocslc24a5主要在背部和卵黄膜中表达;在体节期, Octyr和Ocslc24a5在眼睛、脑和背侧皮肤中表达。以上研究结果说明Octyr和Ocslc24a5可能参与西里伯斯青鳉黑色素的合成,研究为深入了解西里伯斯青鳉黑色素形成的分子机制奠定基础。

• 单位
  上海海洋大学