人CD147胞内结构域蛋白的表达与纯化

作者：吴东; 南刚; 李佳悦; 刘芬玲; 崔洪勇^*

来源：转化医学杂志, 2019, 8(06): 326-338.

• CD147
• 胞内结构域
• 表达与纯化

目的构建人CD147胞内结构域(CD147 intracellular domain,CD147ICD)融合蛋白质粒,表达、提取、纯化CD147ICD蛋白并进行蛋白质互作分析。方法将CD147ICD的c DNA片段插入pET-32a(+)质粒载体后,转化大肠杆菌Origami B(DE3)感受态细胞,大量培养后用异丙基硫代-β-d-半乳糖苷诱导蛋白表达,超声破碎法裂解细胞,采用Ni-Sepharose FF预装柱纯化TrxA-His6-CD147ICD融合蛋白,经凝血酶酶切、超滤后获得CD147ICD蛋白。结果 CD147ICD融合蛋白质粒经测序比对后表明构建成功;采用Ni-Sepharose FF预装柱纯化的TrxA-His6-CD147ICD融合蛋白纯度和浓度均较高,经凝血酶酶切、超滤后获得的CD147ICD蛋白纯度在95%以上,蛋白浓度为0. 74 mg/m L。结论纯化出了高纯度的、具有生物学活性的CD147ICD蛋白,为CD147ICD互作分子的鉴定及结构解析奠定了基础。

• 单位
  基础医学院; 中国人民解放军空军军医大学