LC-1ScFv偶联GFP基因的构建及表达

作者：龚兴国; 于红; 徐飞虎; 谭皓思

来源：浙江大学学报(工学版), 2005, 39(05): 751-755.

DOI：10.3785/j.issn.1008-973X.2005.05.031

• 绿色荧光蛋白
• 单链抗体
• 原核表达系统

从具有高效蛋白表达及活力的抗肺癌杂交瘤单克隆细胞株(LC-1)抽提总RNA,反转录成cDNA.根据肿瘤单链抗体(ScFv)基因设计引物,用多聚酶链式反应(PCR)克隆出抗体的重链和轻链基因,并通过重叠延伸PCR法将重链基因与修饰后的轻链基因连接为单链抗体基因.改造后的ScFv与绿色荧光蛋白(GFP)基因连接,构建表达质粒ProGFP-ScFv,随后转化大肠杆菌JM109,用诱导剂IPTG进行诱导表达.表达产物采用Ni-NTA树脂进行纯化,进行SDS-PAGE电泳分析其纯度.酶联免疫检测(ELISA)表明该蛋白已具有抗体活性.395nm激光激发显示绿色荧光,表明目的基因在原核生物中存在表达.

• 单位
  浙江大学; 生命科学学院