APPL1减轻LPS诱导的心肌细胞损伤的实验研究

作者：李波^*; 郑植; 陈芃螈

来源：中国病理生理杂志, 2019, 35(08): 1526-1531.

• 心肌细胞
• APPL1蛋白
• 脂多糖
• 细胞凋亡
• 氧化损伤

目的:探讨APPL1对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞损伤的影响。方法:用LPS处理心肌细胞,RT-qPCR和Western blot检测细胞中APPL1的表达变化。用过表达APPL1重组慢病毒载体转染心肌细胞,经LPS处理后,RT-qPCR和Western blot检测过表达效果。MTT测定心肌细胞活力,流式细胞术测定心肌细胞凋亡变化,Western blot测定心肌细胞中活化的caspase-3蛋白水平,用硫代巴比妥酸法检测心肌细胞中丙二醛(MDA)含量,用2,4-二硝基苯肼显色法检测心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平,用黄嘌呤氧化酶法检测心肌细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,5,5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)比色法测定心肌细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,DCFH-DA法检测心肌细胞中活性氧(ROS)水平。结果:与对照心肌细胞比较,LPS处理后心肌细胞中APPL1的mRNA和蛋白水平均显著降低(P<0.05)。与单纯LPS处理的心肌细胞比较,过表达APPL1重组慢病毒载体可以显著提高LPS条件下心肌细胞中APPL1 mRNA和蛋白水平(P<0.05)。LPS处理后的心肌细胞活力降低,细胞凋亡率和细胞中活化的caspase-3蛋白水平升高,细胞中MDA水平升高,培养液中LDH水平也升高,细胞SOD活性、GSH-Px活性降低,ROS水平升高,(P<0.05)。过表达APPL1后的心肌细胞经LPS诱导后,细胞活力升高,细胞凋亡率及细胞中活化的Caspase-3蛋白水平降低,MDA水平降低,培养液中LDH水平降低,细胞中SOD活性、GSH-Px活性升高,ROS水平降低,(P<0.05)。结论:过表达APPL1能够降低LPS诱导的心肌细胞氧化损伤,减少细胞凋亡,具有减轻LPS诱导的心肌细胞损伤的作用。

• 单位
  四川省医学科学院; 四川省人民医院