过表达微小RNA-130a-3P对LPS诱导心肌细胞损伤的干预作用及其机制

作者：苗莹莹; 袁欢欢; 黄敏杰; 付升旗^*

来源：中国应用生理学杂志, 2022, 38(04): 335-340.

• 微小RNA-130a-3p
• PI3K/AKT信号通路
• 自噬
• 细胞凋亡
• 细胞损伤

目的:探讨miRNA-130a-3p对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞自噬与凋亡的影响及分子机制。方法:H9C2心肌细胞随机分为5组，即正常对照组，LPS模型组，miRNA阴性对照组(miRNA-negative control组),miRNA-130a-3p mimics组(过表达miRNA-130a-3p),miRNA-130a-3p mimics+LY294002组(过表达miRNA-130a-3p+PI3K抑制)。LPS模型组即终浓度为10μg/ml的LPS诱导24 h, miRNA阴性对照组与miRNA-130a-3p mimics组是利用lipo3000将阴性对照miRNA及miRNA-130a-3p mimics转染至H9C2细胞，培养24 h后，再将LPS加入培养基中培养24 h。miRNA-130a-3p mimics+LY294002组是利用lipo3000将miRNA-130a-3p mimics转染至H9C2细胞，同时在培养基中加入10μmol/L(终浓度)的LY294002,培养24 h后，再将浓度为10μg/ml的LPS加入培养基中培养24 h。所有实验均重复5次以上。利用RT-qPCR检测细胞中miRNA-130a-3p mRNA的表达水平，利用CCK-8实验检测细胞活性，利用ELISA实验检测细胞培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL-1β)的含量，利用比色法检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量；利用Western blot检测细胞中p-PI3K蛋白，p-AKT蛋白，Bax蛋白，Bcl-2蛋白，cleaved-caspase-3蛋白，LC3蛋白，p62蛋白的表达水平。结果:结果显示，与正常组相比较，LPS模型细胞中miRNA-130a-3p mRNA水平，p-PI3K蛋白与p-AKT蛋白的水平显著低于正常对照组(P<0.01);与LPS组相比较，miRNA-130a-3p mimics组细胞中p-PI3K,p-AKT蛋白的表达显著升高(P<0.01,P<0.05);与正常对照组相比较，LPS组细胞活性显著降低，细胞培养液中TNF-α,IL-6,IL-1β及LDH的含量显著升高(P<0.01), SOD的含量显著降低(P<0.01),细胞中Bax蛋白，cleaved caspase-3蛋白，p62蛋白的表达显著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白的表达和LC3II/I的比率显著降低(P<0.01);与LPS组相比较，miRNA-130a-3p mimics可提高细胞活性，降低细胞培养液中TNF-α,IL-6,IL-1β及LDH的含量(P<0.01,P<0.05),提高SOD的含量(P<0.05),降低细胞中Bax蛋白，cleaved caspase-3蛋白，p62蛋白的表达(P<0.01),促进Bcl-2蛋白的表达(P<0.01),提高LC3II/I的比率(P<0.05);与miRNA-130a-3p mimics组相比较，miRNA-130a-3p mimics+LY294002组，可部分逆转miRNA-130a-3p mimics对细胞的作用。结论:过表达miRNA-130a-3p可部分通过激活PI3K/AKT信号通路促进细胞的自噬与抑制细胞凋亡，减轻LPS诱导的心肌细胞损伤。

• 单位
  基础医学院; 新乡医学院三全学院; 新乡医学院; 解剖学教研室