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摘要
目的：明确疏肝补肾毓麟汤畅通自噬流，通过PTEN诱导假定激酶1(PTEN-induced putative kinase 1，PINK1)/帕金蛋白(Parkin)通路，调节线粒体功能，提高精子活力的作用机制。方法：通过随机数字表法将SD大鼠分为正常组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、五子衍宗丸对照组。采用腺嘌呤(0.05 g·kg-1)灌胃14 d，复制少弱精症大鼠模型。正常组与模型组给予等容生理盐水，中药高、低剂量组给药32.4g/kg/d、8.1g/kg/d，五子衍宗丸对照组给药2.6g/kg/d。全自动精子分析仪检测精子活力，透射电镜观察睾丸组织中线粒体自噬的超微结构变化、JC-1线粒体膜电位检测试剂盒与流式细胞仪检测线粒体膜电位水平变化、免疫荧光标记线粒体外膜易位酶20(Translocase of the outer membrane of mitochondrion 20，TOMM20)与微管相关蛋白1轻链3II(Microtubule-associated protein 1 light chain 3II，LC3II)的共定位、PCR与Western Blot检测睾丸组织PINK1、Parkin、选择性自噬接头蛋白62(Selective autophagy adaptor protein 62，P62)、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3II/I)的表达。结果：与正常组相比，模型组的精子活动力下降(P＜0.05)，线粒体膜电位比例下降(P＜0.05)，线粒体超微结构出现核周聚集，嵴受损或丢失，除了碎裂外，还有暗基质，以及外膜不规则，并且受损的线粒体与包括线粒体吞噬体在内的线粒体空泡相关，免疫双染中发现LC3II的存在量明显增多，LC3II与TOMM20的双重标记也增加，自噬相关指标PINK1、Parkin、LC3II/I、P62的基因与蛋白表达增加(P＜0.05)。与模型组相比，高剂量组、低剂量组、对照组的精子活动力升高(P＜0.05)，线粒体膜电位比例增加(P＜0.05)，超微结构下正常形态的线粒体比例明显增多，且线粒体溶酶体的数量也减少，免疫双染中发现LC3II的存在量明显减少，LC3II与TOMM20的双重标记减少，自噬相关指标PINK1、Parkin、LC3II/I、P62的基因与蛋白表达减少(P＜0.05)。与对照组相比，高剂量组的线粒体膜电位比例增加(P＜0.05)；高剂量组、低剂量组超微结构下正常形态的线粒体比例明显增多，且线粒体溶酶体的数量也减少，免疫双染中发现LC3II的存在量明显减少，LC3II与TOMM20的双重标记减少，自噬相关指标PINK1、Parkin、LC3II/I、P62的基因与蛋白表达减少(P＜0.05)。结论：疏肝补肾毓麟汤能改善精子活力低下症模型大鼠的精子活动力，可能是通过提高模型大鼠的线粒体膜电位水平，保护线粒体功能，下调PINK1、Parkin、LC3 II/I、P62的表达，并畅通自噬流，减轻线粒体的过度自噬来发挥作用。
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单位湖北省中西医结合医院; 湖北中医药大学
