COL10A1在头颈鳞癌组织的表达及其对癌细胞增殖和侵袭的影响

作者：崔萌; 杜伟; 罗瑞华; 刘善廷; 齐金星^*

来源：中华实验外科杂志, 2018, 35(11): 2131-2134.

• 头颈鳞癌
• COL10A1
• 增殖
• 侵袭

目的观察COL10A1在头颈鳞癌(HNSCC)组织中的表达,探讨通过短发卡RNA(shRNA)抑制COL10A1表达对HNSCC细胞的作用。方法通过Oncomine数据库和我院收集的7例配对的肿瘤及其正常组织,验证COL10A1蛋白的表达。进一步在细胞株Fadu、Cal-27中检测COL10A1蛋白的表达。以shRNA沉默COL10A1基因后,利用噻唑蓝比色和平板克隆实验检测HNSCC细胞增殖和克隆形成能力,Transwell迁移和侵袭实验验证细胞迁移和侵袭能力。蛋白质印迹实验探讨COL10A1抑制与肿瘤上皮-间充质转化(EMT)之间的联系。结果 Oncomine数据库荟萃分析提示COL10A1在HNSCC中高表达(中位秩92.0,P=0.000);我院组织标本验证COL10A1在HNSCC中表达增高(P=0. 001);同时验证其蛋白的表达水平在HNSCC细胞株(Fadu、Cal-27)中,也较正常上皮细胞中增高。进一步成功合成针对COL10A1的shRNA片段,其抑制效率高达80%;沉默COL10A1后,噻唑蓝(MTT)实验显示Fadu-shRNA组和对照组比较,shRNA组受到抑制(F=234.301 P=0.002),抑制作用随着时间的增加而增加(t=12.814,P=0.017);Cal-27-shRNA组和对照组比较,shRNA组也受到抑制(F=184. 001=0. 028),抑制作用随着时间的增加而增加(t=10. 214,P=0. 026),两组间比较差异无统计学意义(P=0. 067)。平板克隆实验显示Fadu-shRNA、Cal-27-shRNA组单克隆数分别为34. 6±6. 1、30. 3±8. 3,和对照组(Vetor组)76. 2±6. 9、70.0±1.3,空白组73.3±2. 1、71.9±1. 1比较,差异有统计学意义(P=0. 000)。体外Transwell迁移实验显示Fadu-shRNA、Cal-27-shRNA组贴壁24 h后,穿过小室的细胞数分别为65. 3±3. 5、57. 2±5. 3,和对照组(Vetor组)89. 1±1.9、77.2±2.3,空白组83.4±2.1、76. 5±1.1比较,差异有统计学意义(P=0. 000);体外Transwell侵袭实验显示Fadu-shRNA、Cal-27-shRNA组贴壁24 h后,基质膜上的细胞数分别为135.3±6.2、127.6±4.3,和对照组(Vetor组)229.1±5.7、200.3±1.2,空白组216.5±7.8、193.4±2.2比较,差异有统计学意义(P=0.000)。随后验证沉默COL10A1后,EMT表达的变化。Western blot实验显示E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达增多,N-cadherin,Snaill、snail2表达降低。结论 COL10A1在HNSCC组织及细胞株中高表达,沉默COL10A1能抑制HNSCC细胞的集落形成和增殖、降低了细胞的侵袭和迁移能力,伴随着肿瘤EMT的抑制。通过沉默COL10A1导致的头颈肿瘤进展能力的下降,可能和肿瘤的EMT现象相关。

• 单位
  郑州大学