科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
旨在获得强组成型启动子来实现植酸酶YiAPPA在粪肠球菌EXW27中的高效组成型表达。本研究通过对比分析粪肠球菌中16S rRNA的启动子序列,将启动子中非保守区域替换为随机化序列,获得随机的人工启动子序列。然后利用大肠杆菌-乳酸菌穿梭质粒pSIP409中酶切位点构建人工启动子文库,并结合植酸酶活性的高通量筛选技术,筛选获得启动YiAPPA在粪肠球菌EXW27中高效组成型表达的强组成型启动子,实现YiAPPA在粪肠球菌EXW27中成功表达,并研究重组YiAPPA的酶学性质。结果表明,在组成型启动子p10的控制下,重组YiAPPA在粪肠球菌EXW27中成功表达,其表达量约占细胞内蛋白总量的15%。重组YiAPPA的最适反应pH为4.5,在pH1.0～10.0的范围内具有优良的pH稳定性,于55℃的绝对酶活高达3900 U/mg。本研究构建了既具有益生特性又具有植酸酶活性的转基因粪肠球菌,为研制新型转基因微生态制剂奠定了基础。
- 单位
