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摘要
为明确Hsp70蛋白在绿豆象Callosobruchus chinensis高温耐受性中的作用，该研究筛选并克隆β-actin、α-tubulin、β-tubulin、EF1-α、GAPDH、Hsc70、AK和RPL40八个候选内参基因，采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)技术测定其在绿豆象雌雄成虫体内的表达量，通过geNorm、BestKeeperr和NormFinde软件对这8个候选内参基因的表达稳定性进行评价，选择最适宜的内参基因对不同高温胁迫下绿豆象体内Hsp70基因的表达特性进行测定。结果表明，8个候选基因引物均有良好的特异性和引物扩增效率，引物扩增效率介于91.6%～108.1%之间。高温胁迫下，β-tubulin基因较其他7个候选基因有较小的平均变异度、稳定值和标准差，为最适宜的内参基因。39、42和45℃高温处理1 h后绿豆象雌雄成虫体内Hsp70表达水平较对照显著上调，当处理时间延长至3 h后，Hsp70基因的相对表达量较对照也有不同程度上调，但差异不显著，表明绿豆象Hsp70基因可以响应高温胁迫，Hsp70蛋白在绿豆象热耐受过程中发挥着重要作用。
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