梅毒螺旋体膜蛋白Tpp47通过RhoA/ROCK信号通路调控血管内皮细胞通透性

作者：张瑞丽; 王千秋^*

来源：中华皮肤科杂志, 2016, 49(01): 21-25.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2016.01.005

• 苍白密螺旋体
• 内皮, 血管
• 通透性
• 脐静脉
• 肌动蛋白
• Tpp47
• RhoA/ROCK信号通路

目的探讨梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp47对血管内皮细胞通透性影响的调控机制。方法用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)构建细胞单层模型, 重组蛋白Tpp47(rTpp47)直接与HUVEC单层模型混合培养, 或RhoA/ROCK信号通路特异性抑制剂Y-27632预处理后再用rTpp47刺激HUVEC单层模型, 以煮沸灭活的rTpp47处理HUVEC单层模型为阴性对照组, 采用ELISA检测各组培养1、4 h时辣根过氧化物酶(HRP )流量, 培养12h用荧光染料罗丹明-鬼笔环肽染色细胞骨架系统, 共聚焦显微镜下观察细胞骨架蛋白F肌动蛋白排列变化。用Western印迹检测rTpp47与煮沸灭活的rTpp47分别处理HUVEC单层模型后细胞RhoA的表达水平。结果 rTpp47刺激HUVEC单层模型1h时HRP流量(0.81±0.10)高于阴性对照组(0.39±0.09), 差异有统计学意义(P< 0.05), 而此时Y-27632预处理组HRP流量(0.51±0.10)与单用rTpp47刺激组及阴性对照组相比, 差异无统计学意义(均P> 0.05)。培养4h时, 单用rTpp47刺激组HRP流量显著增加(2.31±0.14), 且高于Y-27632预处理组(1.21±0.12)及阴性对照组(0.73±0.12), 差异有统计学意义(均P< 0.05), 而Y-27632预处理组与阴性对照组之间差异无统计学意义。rTpp47刺激HUVEC后, 与煮沸灭活的rTpp47作用HUVEC相比, 细胞中RhoA表达增加。同时, rTpp47刺激细胞中骨架蛋白F肌动蛋白重排, 在胞质中形成应力纤维, 抑制剂Y-27632可部分抑制F肌动蛋白重排。结论梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp47可通过RhoA/ROCK信号转导通路调控血管内皮细胞通透性。

• 单位
  中国医学科学院北京协和医学院; 无锡市第二人民医院; 南京医科大学