PCDH10基因慢病毒载体构建及其在MDA-MB-231细胞中的表达

作者：张微; 岳丽玲; 张延勇; 韩翠翠; 徐天娇; 朱文斌; 刘立琨^*

来源：系统医学, 2019, 4(16): 27-38.

DOI：10.19368/j.cnki.2096-1782.2019.16.027

• PCDH10基因
• 慢病毒载体
• 载体构建
• MDA-MB-231细胞

目的构建原钙黏蛋白10(PCDH10)基因慢病毒表达载体并建立稳定过表达PCDH10的MDA-MB-231细胞系。方法 2018年6—11月,根据PCDH10基因序列设计引物,应用PCR法扩增PCDH10全长片段,连接线性化的pLV-EF1α-GFP-Puro载体,获得pLV-PCDH10慢病毒重组质粒,测序正确后进行PCDH10基因慢病毒载体的包装及滴度测定。将重组质粒pLV-PCDH10转染MDA-MB-231细胞,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测MDA-MB-231细胞中PCDH10的表达情况。结果测序结果证实成功构建慢病毒表达载体pLV-PCDH10,病毒滴度为5×108TU/mL;转染MDA-MB-231细胞后,RT-PCR和Western blot结果显示PCDH10的m RNA和蛋白表达较对照组高表达。结论成功构建pLV-PCDH10慢病毒载体并建立稳定过表达PCDH10的MDA-MB-231细胞系,为深入研究PCDH10基因在乳腺癌发生发展中的功能提供实验基础。

• 单位
  齐齐哈尔医学院