SOX9慢病毒表达载体的构建及其在LNcap细胞中的稳定表达

作者：王江; 段君君; 张小玉; 贾霄; 汪小波; 何颖红

来源：昆明医科大学学报, 2018, 39(02): 5-9.

• SOX9
• 慢病毒表达载体
• LNcap细胞
• 脂质体转染

目的构建SOX9基因慢病毒表达载体,建立稳定表达SOX9的LNCa P细胞株.方法 PCR扩增SOX9基因,将其克隆到慢病毒表达载体p LVX-IRES-Puro中,双酶切和测序鉴定重组质粒.用HEK293细胞包装重组病毒颗粒并感染LNcap细胞,经puromycin筛选获得稳定转染细胞株.q RT-PCR和Western Blot分别检测SOX9 m RNA水平及蛋白表达.结果经双酶切和测序鉴定证实目的片段已插入到慢病毒表达载体上.重组质粒转入LNCa P细胞后经puromycin抗性筛获得稳定表达的细胞株,q RT-PCR检测到SOX9基因在转录水平的表达,Western blot分析显示SOX9蛋白高表达.结论慢病毒表达载体p LVX-IRES-FLAG-SOX9构建成功,实现了SOX9在LNcap细胞中的外源性表达.

• 单位
  大理大学; 基础医学院