Klotho激活自噬对氧化低密度脂蛋白介导的人冠状动脉内皮细胞衰老的影响

作者：毛琦; 邓梦杨; **丰; 赵晓辉^*

来源：解放军医学杂志, 2020, 45(06): 587-595.

• Klotho
• 自噬
• 内皮细胞
• 氧化低密度脂蛋白
• 衰老

目的探讨Klotho激活自噬对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)介导的人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)衰老的影响。方法体外培养HCAEC,并将细胞分为对照组与ox-LDL处理组,Klotho (400 pmol/L)预处理2 h,以不同浓度(0、25、50、75、100 μg/ml)及不同时间(0、24、48、72、96 h)的ox-LDL继续处理细胞。CCK-8法检测HCAEC活力,SA-β-GAL染色检测衰老细胞,免疫荧光检测胞内P53及P16蛋白表达情况,Western blotting检测P53、P16、LC3及P62蛋白的表达。分别采用Klotho(400 pmol/L)、雷帕霉素(5 μmol/L)、氯喹(2 μmol/L)在正常培养条件下预处理HCAEC 2 h,再给予ox-LDL(75 μg/ml)处理并继续培养72 h。CCK-8法检测HCAEC活力,SA-β-GAL染色检测衰老细胞,转染腺病毒GFP-LC3检测细胞自噬情况,Western blotting检测P53、P16、LC3及P62蛋白的表达。结果 CCK-8法检测结果显示,Klotho减少了ox-LDL对细胞活力的抑制(P<0.05);SA-β-GAL染色结果显示,Klotho降低了ox-LDL介导的衰老细胞比例(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,Klotho下调了ox-LDL介导的P53及P16蛋白的表达(P<0.05);ox-LDL一定程度上以剂量依赖和时间依赖的方式降低了LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值并升高了P62蛋白的表达水平(P<0.05);Klotho增加了ox-LDL条件下LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(P<0.01),降低了P62蛋白的表达水平(P<0.01),并减轻了氯喹对自噬的抑制作用(P<0.05)。CCK-8法、SA-β-GAL染色及Western blotting检测结果分别显示,ox-LDL+Klotho组、ox-LDL+雷帕霉素组的细胞活力、衰老细胞比例、P53及P16蛋白表达较ox-LDL组均明显改善(P<0.01);而氯喹+ox-LDL组的细胞活力、衰老细胞比例、P53及P16表达较ox-LDL组均明显恶化(P<0.05或P<0.01)。结论 Klotho通过激活自噬改善了ox-LDL介导的HCAEC衰老。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 新桥医院