HIV-1整合酶核心区可溶性表达及抑制剂筛选

作者：何红秋; 贾渝跃

来源：中国生物工程杂志, 2012, (03): 14-19.

DOI：10.13523/j.cb.20120303

• HIV-1
• 整合酶核心区
• 可溶性表达
• 纯化
• 抑制剂筛选 HIV-1 IN-CCD Soluble expression Purification Inhibitor screening

为了实现HIV-1整合酶蛋白核心区(central core domain of integrase,IN-CCD)的可溶性表达,并建立以IN-CCD为靶点的抑制剂体外筛选方法,从包含F185K突变HIV-1 IN基因的质粒中经PCR扩增得到含有F185K突变的IN-CCD基因,克隆到pET28b载体上构建重组质粒pIN-CCD,转化pIN-CCD至E.coli BL21(DE3)中经IPTG诱导、表达,Ni-亲和层析纯化,获得IN-CCD蛋白。修饰DNA底物,以链亲和素包被的磁珠为载体捕获DNA产物,结合酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测IN-CCD的去整合活性,并筛选以IN-CCD为靶点...

• 单位
  重庆市科学技术研究院