肠道病毒71型2C蛋白原核表达及抗体制备

作者：郑方亮; 王励; 于亮; 郑振华; 郑才尚; 刘宏生

来源：微生物学杂志, 2014, 34(06): 10-14.

• EV71病毒
• 2C蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体

肠道病毒71型(EV71)的非结构蛋白2C(P2C)在病毒复制周期中起着重要的作用,制备P2C的特异性抗体,对研究P2C的生物学功能以及EV71与宿主相互作用的具体机制有非常重要的意义。实验将2C基因克隆到原核表达载体p ET-28a(+)上,在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达出重组蛋白r P2C,进一步优化原核表达条件,在温度为30℃,诱导剂IPTG浓度为1 mmol/L时,蛋白表达量最高,且主要以包涵体形式存在。直接将获得的r P2C通过SDS-PAGE分离后免疫新西兰兔,制备EV71病毒P2C的兔多克隆抗体。通过Western blot检测,该抗体在110 000稀释比例下仍能很好地识别原核表达的r P2C。同时该抗体也能很好地检测到EV71感染RD细胞中的P2C。因此,实验制备出的抗P2C抗体特异性强、效价高,为后续P2C功能的研究以及EV71病毒检测提供了良好的材料。

• 单位
  辽宁大学; 中国科学院武汉病毒研究所; 病毒学国家重点实验室; 生命科学学院