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摘要
[背景]丝氨酸合成途径(SSP)关键酶在肿瘤的生长、增殖、侵袭中发挥重要作用，但其在砷致癌中的作用尚不明确。[目的]以人永生化皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)和NaAsO2所致恶性转化HaCaT(T-HaCaT)细胞为研究对象，观察NaAsO2染毒对SSP关键酶[如磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)、磷酸丝氨酸转氨酶1(PSAT1)和磷酸丝氨酸磷酸酶(PSPH)]表达及对细胞增殖、迁移能力的影响，探讨SSP关键酶在砷致癌中的作用。[方法](1)取课题组前期构建的T-HaCaT细胞，实验分组为传代对照(0μmol·L-1 NaAsO2)组、THaCaT(0.5μmol·L-1 NaAsO2)组、NCT503(PHGDH抑制剂，25μmol·L-1组、NCT503(25μmol·L-1+T-HaCaT(0.5μmol·L-1 NaAsO2)组。Western blotting法检测传代对照组和T-HaCaT组细胞的SSP关键酶蛋白表达水平，CCK8法和细胞划痕试验分别检测各组细胞的增殖率和迁移率。(2)取生长良好的对数生长期HaCaT细胞，以0、0.625、1.25和2.5μmol·L-1 NaAsO2染毒细胞0、24、48和72 h，检测细胞增殖率和SSP关键酶的蛋白表达水平。后续实验给予HaCaT细胞25μmol·L-1 NCT503预处理6 h后，用2.5μmol·L-1 NaAsO2继续染毒72 h，实验分组为对照(0μmol·L-1NaAsO2)组、染毒(2.5μmol·L-1NaAsO2)组、预处理组(25μmol·L-1NCT503)、预处理(25μmol·L-1 NCT503)+染毒(2.5μmol·L-1 NaAsO2)组，检测各组细胞的增殖率。[结果] T-HaCaT组细胞中PHGDH的蛋白表达水平是传代对照组的1.60倍(P <0.05)，其增殖率(177.51%±14.69%)和迁移率(53.85%±0.94%)高于传代对照组[(100.00%±0.00%)、(24.30%±2.26%)](均P <0.05)。NCT503干预后，NCT503+T-Ha CaT组细胞的增殖率(144.97%±8.08%)和迁移率(35.80%±0.99%)较T-HaCaT组细胞降低(均P <0.05)。NaAsO2染毒72 h后HaCaT细胞的增殖率随染毒浓度的增加而增加(r=0.862,P <0.05)，与此一致，各染毒组HaCaT细胞中SSP关键酶的蛋白水平均较对照组表达增加(均P <0.05)。2.5μmol·L-1 NaAsO2染毒后的HaCaT细胞增殖率随染毒时间的延长而增加(r=0.775,P <0.05)，与细胞中PHGDH蛋白表达水平的变化一致。NCT503干预后，预处理+染毒组细胞增殖率低于染毒组细胞(P <0.05)。[结论] SSP关键酶可能在NaAsO2所致的T-HaCaT细胞增殖中扮演重要的角色。
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