马动脉炎病毒主要结构蛋白基因酵母工程菌的构建及鉴定

作者：杜建; 王志亮; 宋厚辉; 金宁一; 张念祖

来源：中国兽医杂志, 2005, (11): 4-6.

• 马动脉炎病毒
• 结构蛋白基因
• 克隆
• 汉逊酵母菌 equine arteritis virus
• structural protein gene
• cloning
• Hansenula polymorpha Yeast

目的:构建马动脉炎病毒读码框ORF5、ORF6、ORF7主要结构蛋白基因全长片段的克隆载体及汉逊酵母穿梭载体,并获得重组工程菌,为下一步酵母表达重组目的蛋白奠定基础。方法:应用RT-PCR方法从病毒核酸中扩增ORF5、ORF6和ORF7读码框的全长基因,产物回收后分别与PUC18和PMD18-T载体连接并转化DH5αE.coli,经氨苄筛选及测序,建立克隆载体PUC18-GL、PUC18-M和PMD18T-ORF7;以构建的克隆载体为模板,用重新设计的引物构建了汉逊酵母分泌性穿梭载体,然后电转化至汉逊酵母基因组中。结果:所有重组质粒经PCR和酶切鉴定均出现目的片段,测序结果证实正确,目的基因O...

• 单位
  农业部动物检疫所; 中国科学院微生物研究所