基于Wnt/β联蛋白信号通路探讨EphB2抑制剂对皮肤鳞状细胞癌的影响及作用机制

作者：李艳; 张选奋^*; 张文芳

来源：中华皮肤科杂志, 2022, 55(04): 321-328.

• 癌, 鳞状细胞
• 受体, EphB2
• 上皮-间质转化
• Wnt信号通路
• β连环素
• 肿瘤, 实验性
• 芦荟大黄素
• 山奈苷
• 分子对接
• 虚拟筛选

目的采用分子对接法筛选酪氨酸蛋白激酶受体B2(EphB2)小分子抑制剂, 研究其对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)的影响及可能机制。方法利用Schrodinger对接工具预测EphB2蛋白的三维结构及其配体结合位点, 通过分子对接进行高通量虚拟筛选EphB2抑制剂, 通过体内外实验验证筛出的EphB2抑制剂山奈苷与芦荟大黄素(AE)抗CSCC的作用及机制。体外实验中, 将人CSCC细胞系A431、SCL-1及人永生化表皮细胞HaCaT分别分为空白对照组、二甲基亚砜组、AE组与山奈苷组, 通过MTT实验(AE浓度:20、40、80、160 μmol/L;山奈苷浓度:12.5、25、50、100 μmol/L)、划痕实验及Transwell小室实验(AE浓度:80 μmol/L, 山奈苷浓度:50 μmol/L)分析EphB2抑制剂对CSCC细胞增殖、迁移、侵袭的影响。体内实验中, SPF级BALB/c雌性裸鼠皮下注射0.2 ml A431细胞悬液, 待成功长出瘤体以后, 随机分为4组(n = 6), 空白对照组、二甲基亚砜组、AE组(腹腔注射AE 20 mg·kg-1·d-1 AE)与山奈苷组(腹腔注射山奈苷25 mg·kg-1·d-1);每周测量裸鼠的肿瘤大小和体重;连续给药28 d后, 剥取裸鼠移植瘤进行HE染色, qRT-PCR与Western blot分析AE和山奈苷对裸鼠移植瘤中上皮钙黏着蛋白、波形蛋白、磷酸化葡萄糖合成激酶3β(p-GSK-3β)、β联蛋白及GSK-3β表达的影响。组间比较采用单因素方差分析及t检验。结果筛选出对EphB2具有较高抑制活性的两个小分子化合物AA-504/20999031(山奈苷)和AA-466/21162055(AE)。MTT实验结果表明, 与HaCaT细胞相比, AE对SCL-1和A431细胞具有强烈的细胞毒性, 且随AE浓度升高毒性变强(F = 17.95, P<0.001), 作用48 h时, IC50分别为124.59 μmol/L和80.85 μmol/L;山奈苷对SCL-1和A431细胞具有强烈的细胞毒性, 且随山奈苷浓度升高毒性变强(F = 11.34, P<0.001), 作用48 h时, IC50分别为119.64 μmol/L和64.96 μmol/L。划痕实验显示, 与二甲基亚砜组细胞迁移距离(88.1±1.4) μm相比, AE组和山奈苷组A...

• 单位
  兰州大学第二医院