移植术常见病原体检测的多联qPCR法的建立与初步应用

作者：梁珊; 吴潇潇; **; 岳芮名; 黄杨; 刘安庆; 何苗^*

来源：中国输血杂志, 2022, 35(05): 494-500.

DOI：10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2022.05.005

• 实时荧光定量PCR
• 移植术病原体
• 多联检测
• 高通量测序
• 微生物培养法

目的 探讨多联实时荧光定量PCR(qPCR)应用于移植术中常见病原体检测的有效性。方法 选择临床移植术后常见的24种感染病原体，设计qPCR检测体系的引物探针序列，以每种病原体的标准质粒做qPCR反应验证；优化本实验中每种病原体反应体系的引物探针效果及浓度，分析确定qPCR方法的灵敏度、相关系数(R2)、扩增效率(E)后，用四川省人民医院移植ICU提供的肝肾移植患者标本22例做检测体系的应用验证：提取标本的总核酸100μL/(人)份，均分为二，分别以多联qPCR反应体系检测，以高通量测序方法(NGS)分析微生物种类；同时对移植患者的标本2 mL/份做微生物培养法检测。比较3种检测方法的检测结果，将NGS法作为金标准，分析多联qPCR法的阳性检出率，及其与培养法和NGS检测结果的差异。结果 所建立的qPCR检测体系24种病原体的qPCR检测下限均达到101cp/μL,均为R2>0.99;对临床肝肾移植患者标本的病原体阳性检出率59.1%(13/22),NGS法相应为63.6%(14/22)(P>0.05)、微生物培养法为18.2%(4/22)(P<0.05)。检出的病原体比例：人类疱疹病毒6型(HHV-6) 30.8%(4/13)、巨细胞病毒(HCMV) 23.1%(3/13)、EB病毒(EBV)23.1%(3/13)、人细小病毒B19 15.4%(2/13)、流感嗜血杆菌(Hin)15.4%(2/13)、屎肠球菌(Efm)15.4%(2/13)、艰难梭菌(Cd)15.4%(2/13)、大肠杆菌(Eco)7.7%(1/13)、嗜麦芽窄食单胞菌(Sma) 7.7%(1/13)、肺炎克雷伯菌(Kpn)7.7%(1/13)、粪肠球菌(Efa)7.7%(1/13)、肺炎链球菌(Spn)7.7%(1/13)。3种方法的病原体检出一致率32%(7/22),其中多联qPCR法和NGS法的一致率为59%(13/22)和培养法的一致率41%(9/22)。结论 相较于微生物培养法，多联qPCR法对临床移植术中常见病原体的检测灵敏度高、定量准确、用时短、成本低；多联qPCR法结合NGS法、培养法有助于临床快速判断患者移植术后病原体感染状况。

• 单位
  中国医学科学院北京协和医学院; 四川省人民医院