携人乳头瘤病毒6型全基因细胞的组织工程皮片培养的初步研究

作者：王飞^*; 郭宗科; 张红叶; 潘永正; 董正邦; 陈梅; 单莹; 严翘; 卫平

来源：中华皮肤科杂志, 2015, 48(05): 321-325.

• 人乳头状瘤病毒6
• 培养技术
• 病理学
• 病毒包膜蛋白质类
• 皮片培养

目的建立人乳头瘤病毒6型(HPV6)全基因体外组织工程皮片培养模型,为进一步研究HPV病毒周期奠定基础。方法用电转的方法,将HPV6全长线性基因和质粒pEGFP-▲EGFP共转染hTERT细胞,G418抗性筛选,Southern印迹法检测细胞内HPV病毒含量;3T3 J2滋养层细胞、I型鼠尾胶原与含HPV6基因的hTERT细胞(HPV6.hTERT细胞)混合后,在金属网格上共同培养,逐渐形成皮片样结构。HE染色和免疫组化检测皮片的组织结构和HPV6 L1蛋白表达,电镜检查皮片病毒颗粒。结果 HPV6全长线性基因成功转入hTERT细胞,Southern印迹法检测细胞内含HPV6 DNA;与3T3 J2细胞、I型鼠尾胶原共同培养的HPV6.hTERT细胞随时间而增殖分化,逐渐形成具有疣状增生外观的皮片。皮片HE染色显示,培养7d即出现典型的皮肤分层结构;培养21d皮片可见明显乳头瘤样增生、空泡细胞、角化过度、角化不全等HPV感染组织病理表现。免疫组化显示皮片上部有HPV6 L1蛋白表达。电镜检测发现皮片中存在HPV6病毒颗粒。结论 HPV6全基因组织工程皮片培养模型为HPV的生物学研究提供了一个平台,但在应用上有一定的局限性。

• 单位
  东南大学; 东南大学附属中大医院