4种急性肝缺血/再灌注损伤大鼠模型的建立及适用性比较

作者：罗嘉琪; 王莉荔; 陈阜东; 张爱舷; 张晗; 张晓萌; 陈力^*

来源：中华危重病急救医学, 2023, 35(06).

• 大鼠
• 急性肝缺血/再灌注损伤
• 模型制备
• 适用性

目的明确4种肝缺血/再灌注损伤(IRI)大鼠模型的制备方法, 确定与临床情况相符、病理生理损伤程度稳定、易于操作的肝IRI动物模型。方法将160只雄性SD大鼠采用区间分组法随机分为70% IRI(A组)、100% IRI(B组)、70% IRI+30%肝切除(C组)、100% IRI+30%肝切除(D组)4种模型组, 每组40只;每种模型再按缺血时间随机分为假手术组(s组)和缺血30、60、90 min组, 每组10只。术后观察大鼠生存状态、苏醒时间;记录C、D组切除肝叶质量、出血量、止血时间。于再灌注6 h经心脏穿刺取血, 检测血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)水平, 判断肝肾功能损伤情况;采用苏木素-伊红(HE)染色、免疫组化巨噬细胞染色, 从病理学角度分析肝组织结构损伤情况。结果 A组大鼠苏醒早, 精神尚可;余组大鼠苏醒晚且精神欠佳。D组止血时间平均较C组长1 s左右。70%肝缺血60 min组大鼠的死亡率为0。与假手术组比较, 各实验组大鼠血清AST、ALT、ALP、BUN、SCr、γ-GT水平明显增高, 提示肝IRI大鼠肝肾功能受损;A、B、C 3组中缺血90 min组较缺血30 min组AST、ALT、ALP、BUN、SCr、γ-GT升高更明显〔AST(U/L):A组为834.94±56.73比258.74±18.33, B组为547.63±217.40比277.67±57.92, C组为930.38±75.48比640.51±194.20;ALT(U/L):A组为346.78±25.47比156.58±13.25, B组为408.40±138.25比196.80±58.60, C组为596.41±193.32比173.76±72.43, ALP(U/L):A组为431.21±34.30比315.95±15.64, B组为525.88±62.13比215.63±17.31, C组为487.53±112.37比272.46±92.33, BUN(U/L):A组为18.35±5.63比14.32±2.30, B组为30.21±4.55比17.41±8.14, C组为20.50±3.64比15.93±3.22, SCr(U/L):A组为27.47±8.91比22.37±5.66, B组为43.60±15.57比36.80±7.95, C组为63.81±20.24比42.47±7.03, γ-GT(U/L):A组为15.64±3.57比6.82±1.48, B组为9.28±1.91比5.62±1.21, C组为10.98±3.18比5.67±1.10, 均P<0.05〕;100% IRI 90 min组和100% IRI 90 min+30%肝切除组较相应70% IRI对照组上述指标升高更明显, 说明血流阻断+肝切除的大鼠肝肾功能损害增加。HE染色可见假手术组肝组织结构清晰, 细胞完整, 排列整齐;各实验组细胞结构破坏, 出现断裂或塌陷, 细胞水肿, 部分细胞有核固缩、胞质深染, 脱落坏死, 间质有炎症细胞浸润。免疫组化染色可见各实验组巨噬细胞多于假手术组。结论成功建立4种肝IRI大鼠模型, 随着肝缺血时间延长和缺血程度加大, 肝细胞缺血加重, 肝细胞缺氧坏死增加, 符合肝IRI的特点, 能完美模拟肝外伤后的肝IRI, 其中100%缺血+30%肝切除组肝损伤最为严重。该模型设计合理、操作简单、重复性好, 可用于临床机制、药物疗效及诊疗方法的探究。

• 单位
  解放军总医院