基于CRISPR/Cas9构建Msx1-Cre小鼠模型

作者：陈毅斌; 李琳君; 董碧莹; 林陈胜^*

来源：口腔生物医学, 2020, 11(03): 156-160.

• CRISPR/Cas9
• Msx1
• Cre
• 小鼠模型

目的:构建肌节同源盒基因1(Msx1)-Cre小鼠模型。方法:基于CRISPR/Cas9技术,设计靶向切割Msx1基因启动子下游的单链向导RNA(sgRNA),并构建包含Cre序列的同源重组片段;构建sg RNA载体质粒,转染至小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3),并在细胞水平验证sg RNA的打靶效率和脱靶情况;将靶向切割Msx1基因的sg RNA、Cre同源重组片段及Cas9蛋白等混合溶液经体外显微注射至C57BL/6J小鼠的受精卵,3周后获得小鼠,利用PCR技术鉴定获得的F0代Msx1-Cre小鼠,并将构建成功的Msx1-Cre模型小鼠与Rosa26R-mTmG模型小鼠交配,进行功能验证。结果:设计的sg RNA能够有效定点切割Msx1基因启动子下游靶位点;成功获得Msx1-Cre小鼠模型; Msx1-Cre模型小鼠与Rosa26R-mTmG模型小鼠交配,子代小鼠免疫荧光结果显示,小鼠绿色荧光蛋白(GFP)特异定位于表达MSX1细胞的细胞膜上。结论:成功构建了Msx1-Cre小鼠模型,可用于示踪Msx1基因以及在表达MSX1的牙间充质细胞中进行条件性敲除或过表达实验来研究牙发育过程中特定基因的功能。

• 单位
  福建师范大学; 生命科学学院