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摘要
目的 探究芍药苷(Paeoniflorin, PAE)对蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage, SAH)早期脑损伤大鼠NLR家族Pyrin域蛋白3(NLR family Pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性小体表达的影响。方法 将60只大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(SAH)组、芍药苷低剂量(PAE-L)组、芍药苷高剂量(PAE-H)组；Sham组不刺破血管，其余各组采用血管内穿孔法构建SAH大鼠模型；PAE-L组、PAE-H组腹腔注射对应剂量的芍药苷(10、20 mg/kg),Sham组、SAH组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液，2次/d,共3 d;采用Garcia评分法评估大鼠神经功能；SAH评分法评估蛛网膜下腔出血情况；脑组织含水量测定评估脑水肿；伊文思蓝(Evans blue, EB)染色评估血脑屏障通透性；苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin, HE)染色观察大鼠脑组织病理损伤；TdT介导的dUTP末端标记法(TdT-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL)染色检测神经元凋亡；免疫荧光染色检测NLRP3、离子钙结合衔接分子-1(Ionized calcium binding adapter molecule-1,Iba-1)和髓过氧化物酶(Myeloperoxidase, MPO)表达水平；免疫组化染色检测NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Cysteinyl aspartate-specific proteinase, Caspase-1)表达水平；Western Blot检测B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X的蛋白质(Bcl-2-Associated X protein, Bax)、Caspase-3,NLRP3,ASC,Caspase-1、白介素-1β(Interleukin-1 β,IL-1β)、IL-18、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Iba-1和MPO表达水平。采用氧化血红蛋白(Oxygenated hemoglobin, OxyHb)构建原代皮层神经元体外SAH模型，并将其分为对照(Control)组、模型(OxyHb)组、芍药苷低剂量(PAE-L)组和芍药苷高剂量(PAE-H)组；Control组正常培养，OxyHb组、PAE-L组、PAE-H组神经元在含20 uM OxyHb的神经元培养基中培养，PAE-L组、PAE-H组分别加入对应剂量的芍药苷(10、20 uM);各组神经元孵育48 h;采用细胞计数试剂盒8(Cell counting kit 8,CCK8)法和TUNEL染色检测神经元活性及凋亡；Western Blot检测Bcl-2,Bax, Caspase-3的表达水平。结果 动物模型显示，Sham组大鼠脑组织未见积血，脑组织细胞结构清晰可辨；与Sham组比较，SAH组脑组织可见大量积血，脑组织细胞排列松散，Garcia评分降低(P<0.05),SAH评分、脑含水量、EB渗出量升高(P<0.05),神经元TUNEL阳性细胞数增加(P<0.05),Bcl-2表达水平降低，Bax, Caspase 3,NLRP3,ASC,Caspase-1,IL-1β,IL-18,TNF-α表达水平升高(P<0.05),Iba-1和MPO阳性细胞数增加(P<0.05);与SAH组比较，PAE-L组、PAE-H组脑组织积血减少，脑组织细胞状态趋于正常，Garcia评分升高(P<0.05),SAH评分、脑含水量、EB渗出量降低(P<0.05),神经元TUNEL阳性细胞数减少(P<0.05),Bcl-2表达水平升高，Bax, Caspase 3,NLRP3,ASC,Caspase-1,IL-1β,IL-18,TNF-α表达水平降低(P<0.05),Iba-1和MPO阳性细胞数减少(P<0.05)。细胞模型显示，Control组神经元形态正常；与Control组比较，OxyHb组神经元肿胀，突触丧失，神经元活性降低，凋亡率增高(P<0.05),Bcl-2表达水平降低，Bax, Caspase 3表达水平升高(P<0.05);与OxyHb组比较，PAE-L组、PAE-H组细胞损伤减轻，神经元活性升高，凋亡率降低(P<0.05),Bcl-2表达水平升高，Bax, Caspase 3表达水平降低(P<0.05)。结论 芍药苷能够减轻SAH后大鼠脑水肿、细胞凋亡和神经损伤，其机制可能为通过抑制NLRP3炎性小体的激活，并抑制小胶质细胞和中性粒细胞浸润，改善SAH后早期脑损伤。
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单位雅安市人民医院
