艰难梭状芽孢杆菌谷氨酸脱氢酶的原核表达、纯化及其酶活性

作者：杜茜; 吴志鹃; 蔡雪飞; 袁作为; 张君; 郑建

来源：中国生物制品学杂志, 2013, (07): 927-930+934.

DOI：10.13200/j.cjb.2013.07.36.dux.003

• 艰难梭状芽孢杆菌
• 谷氨酸脱氢酶
• 基因表达
• 纯化
• 酶活性 Clostridium difficile
• Glutamate dehydrogenase(GDH)
• Gene expression
• Purification
• Enzyme activity

目的原核表达艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile,CD)谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase,GDH),纯化重组蛋白,并检测其酶活性。方法采用PCR法从标准株ATCC BAA-1805中扩增GDH基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28-GDH,转化感受态大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,并通过Ni-NAT层析柱分离纯化后,根据脱氢酶酶活测定方法,测定纯化蛋白的酶活性。结果重组表达质粒pET-28-GDH经双酶切及测序,证实构建正...

• 单位
  重庆医科大学