NIN1结合蛋白1激活人Src原癌基因调控前列腺癌细胞生物学特性的研究

作者：房晓; 王健; 张向明; 鲍一; 王军凯^*

来源：上海医学, 2019, 42(10): 600-605.

DOI：10.19842/j.cnki.issn.0253-9934.2019.10.005

• 前列腺肿瘤
• 基因, Src
• NIN1结合蛋白1

目的探讨NIN1结合蛋白1(NOB1)对前列腺癌细胞生物学特性的影响及其作用机制。方法采用实时定量PCR和Western印迹法检测常见前列腺癌细胞22RV1、PC-3、DU145、LNCap中NOB1的表达量;构建NOB1干扰慢病毒,转染前列腺癌细胞PC-3、DU145,并检测干扰效率。采用MTT法检测敲低NOB1后前列腺癌细胞PC-3和DU145增殖活性,应用流式细胞技术检测敲低NOB1后前列腺癌细胞PC-3和DU145周期,采用Transwell实验检测转染NOB1干扰慢病毒后前列腺癌细胞PC-3和DU145的侵袭能力。检测敲低NOB1后的人Src原癌基因(c-Src)磷酸化水平。结果恶性程度较高的前列腺癌细胞22RV1、PC-3、DU145的NOB1 mRNA相对表达量均显著高于恶性程度较低的前列腺癌细胞LNCaP(P值均<0.05);前列腺癌细胞22RV1、PC-3、DU145的NOB1蛋白质相对表达量均显著低于前列腺癌细胞LNCaP(P值均<0.05)。在NOB1表达量较高的前列腺癌细胞PC-3和DU145中转染NOB1干扰慢病毒(Lv-shNOB1,敲低组)和空白对照慢病毒(Lv-shCtrl,阴性对照组)以构建NOB1敲低模型,PC-3、DU145细胞的敲低组NOB1 mRNA相对表达量均显著低于空白对照组(不转染病毒)和阴性对照组(P值均<0.05),表明构建慢病毒介导NOB1稳定敲低前列腺癌细胞PC-3和DU145。PC-3、DU145细胞的敲低组NOB1蛋白质相对表达量均显著低于空白对照组和阴性对照组(P值均<0.05)。实验第3、4、5天,PC-3、DU-145细胞敲低组A595值均显著低于阴性对照组同时间(P值均<0.05)。PC-3和DU145细胞阴性对照组的G0/G1期细胞百分比均显著低于敲低组(P值均<0.05),S期细胞百分比均显著高于敲低组(P值均<0.05)。PC-3、DU145细胞敲低组的迁移细胞数均显著低于阴性对照组和空白对照组(P值均<0.01)。PC-3、DU145细胞敲低组c-Src(tyr416位点)的磷酸化半定量均显著低于阴性对照组(P值均<0.01)。结论敲低NOB1可能通过抑制c-Src的磷酸化来降低前列腺癌细胞的增殖和侵袭能力。

• 单位
  南通市第二人民医院; 上海长征医院