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摘要
目的探讨凉血活血方对脓毒症急性肾损伤(AKI)小鼠肠道菌群、肠道屏障及肾组织NOD样受体蛋白3/天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1/焦孔素D(NLRP3/caspase-1/GSDMD)细胞焦亡信号通路的影响。方法将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、脓毒症+凉血活血方组(CLP+LXHX组), 每组10只。通过盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症AKI小鼠模型;Sham组仅进行开腹处理。制模前2 h, CLP+LXHX组给予凉血活血方水煎剂(6 g/kg)灌胃治疗;Sham组及CLP组给予等体积生理盐水灌胃。制模后24 h, 麻醉处死小鼠, 取结肠和肾组织及结肠内新鲜粪便。光镜下观察小鼠肾组织和结肠组织的病理变化;采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测小鼠肾脏组织炎症因子白细胞介素(IL-1β和IL-18)的mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测小鼠肾组织中NLRP3、caspase-1和GSDMD的蛋白表达;采用16S rDNA高通量测序检测小鼠肠道菌群的变化。结果与Sham组比较, CLP组肾脏组织炎症细胞浸润增加, 肾脏空泡化, 肾脏组织中IL-1β和IL-18的mRNA表达及NLRP3、caspase-1和GSDMD的蛋白表达均明显升高;结肠组织病理损伤显著, 肠道菌群的物种丰富度显著降低, 肠球菌和埃希菌-志贺菌的相对丰度显著增加, 回肠杆菌属、拟普雷沃菌属、毛螺菌属、克雷伯菌属和副萨特菌属的相对丰度显著升高。与CLP组比较, 凉血活血方可以显著减轻脓毒症小鼠肾脏组织和结肠组织病理损伤, 并降低病理评分(分:肾脏组织为1.75±0.43比3.50±0.50, 结肠组织为1.25±0.43比4.50±0.50, 均P<0.05), 改善肠道菌群组成, 降低肠球菌和埃希菌-志贺菌的相对丰度, 并显著增加乳酸杆菌和阿克曼菌属的相对丰度, 显著降低肾脏组织中IL-1β和IL-18的mRNA表达〔IL-1β mRNA(2-ΔΔCt):1.59±0.05比4.61±0.88, IL-18 mRNA(2-ΔΔCt):1.69±0.17比2.86±0.63, 均P<0.05〕及NLRP3、caspase-1和GSDMD的蛋白表达(NLRP3/GAPDH:0.71±0.04比0.89±0.01, caspase-1/GAPDH:1.04±0.04比1.48±0.04, GSDMD/GAPDH:0.90±0.01比1.41±0.02, 均P<0.05)。结论凉血活血方对脓毒症所致AKI具有明显的保护作用, 其作用机制可能通过调节肠道菌群改善肠道屏障, 从而抑制肾脏组织中NLRP3/caspase-1/GSDMD信号通路的活化, 降低焦亡相关炎症因子的表达。
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单位天津医科大学; 天津市南开医院
