SBF2－AS1通过调控miR－1287－5p/FSCN1轴影响胶质瘤细胞的增殖凋亡和放射敏感性

作者：姜迎海; 夏令杰; 栗超跃^*; 李海芹

来源：中华肿瘤杂志, 2022, 44(08).

• 胶质瘤
• SET结合因子2反义RNA 1
• miR－1287－5p
• 肌成束蛋白1
• 细胞增殖
• 凋亡
• 放射敏感性

目的探讨长链非编码RNA SET结合因子2反义RNA 1(SBF2-AS1)对胶质瘤细胞增殖、凋亡和放射敏感性的影响及作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测正常人脑神经胶质细胞HEB和胶质瘤细胞LN18、SW1088、Hs683中SBF2-AS1、miR-1287-5p和肌成束蛋白1(FSCN1)mRNA的表达水平, Western blot检测细胞中FSCN1蛋白表达水平。以胶质瘤细胞LN18和SW1088为研究对象, 分别转染SBF2-AS1小干扰RNA(siRNA)、miR-1287-5p模拟物或FSCN1 siRNA, 采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖, 流式细胞仪检测细胞凋亡, 克隆形成实验检测细胞放射敏感性, Western blot检测cyclin D1、cleaved-caspase 3和磷酸化组蛋白2A变异体(γ-H2AX)蛋白的表达情况。采用双荧光素酶报告基因实验验证SBF2-AS1与miR-1287-5p、miR-1287-5p与FSCN1的调控关系。结果与HEB细胞比较, 胶质瘤细胞LN18、SW1088和Hs683中SBF2-AS1、FSCN1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05), miR-1287-5p表达水平显著降低(P<0.05)。下调SBF2-AS1、上调miR-1287-5p或下调FSCN1表达后, LN18和SW1088细胞增殖活性和cyclin D1蛋白表达降低(均P<0.001), 凋亡率和cleaved-caspase 3蛋白表达升高(均P<0.001), 存活分数降低(均P<0.001), γ-H2AX蛋白表达升高(均P<0.001)。双荧光素酶报告基因检测结果显示, 共转染miR-1287-5p模拟物与SBF2-AS1-WT或FSCN1-WT的LN18和SW1088细胞荧光素酶活性低于共转染miR-NC与SBF2-AS1-WT或FSCN1-WT的LN18和SW1088细胞(均P<0.001), 而共转染miR-1287-5p模拟物与SBF2-AS1-MUT或FSCN1-MUT的LN18和SW1088细胞与共转染miR-NC与SBF2-AS1-MUT或FSCN1-MUT的LN18和SW1088细胞荧光素酶活性比较, 差异无统计学意义(均P>0.05)。si-SBF2-AS1组LN18和SW1088细胞中miR-1287-5p mRNA的表达水平高于si-NC组(均P<0.05), pcDNA-SBF2-AS1组LN18和SW1088细胞中miR-1287-5p mRNA的表达水平低于pcDNA-NC组(均P<0.05)。miR-1287-5p组LN18和SW1088细胞中FSCN1蛋白表达水平低于miR-NC组(均P<0.05), anti-miR-1287-5p组LN18和SW1088细胞中FSCN1蛋白表达水平高于anti-miR-NC组(均P<0.05)。同时下调miR-1287-5p和SBF2-AS1或同时上调FSCN1和下调SBF2-AS1时, LN18和SW1088细胞增殖活性和cyclin D1蛋白表达升高(均P<0.001), 凋亡率和cleaved-caspase 3蛋白表达降低(均P<0.001), 存活分数升高(均P<0.001), γ-H2AX蛋白表达降低(均P<0.001)。结论 SBF2-AS1在胶质瘤细胞中呈高表达, 下调SBF2-AS1表达通过调控miR-1287-5p/FSCN1轴抑制胶质瘤细胞增殖, 促进细胞凋亡, 并增强细胞的放射敏感性。

• 单位
  河南省人民医院