牛副结核分枝杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作者：王一新; 周晓翠; 高超; 赵鹏; 翟少华; 冯宇^*; 李阳^*

来源：中国兽医杂志, 2021, 57(05): 24-127.

• 牛副结核分枝杆菌
• 实时荧光定量PCR
• 感染调查

根据GenBank上公布的牛副结核分枝杆菌F57基因保守区域设计合成1对引物,建立了副结核分枝杆菌特异的SYBR Green I染料实时荧光定量PCR快速检测方法。以牛副结核分枝杆菌pMD-F57重组质粒为标准品,建立标准曲线,其相关系数为0.999。该方法对副结核分枝杆菌标准菌株的检测呈阳性反应,对结核分枝杆菌、大肠杆菌、肺炎链球菌等常见微生物均呈阴性反应。该方法检测灵敏度可达10个基因拷贝,比常规PCR检测灵敏度提高100倍。重复性检测显示,该方法的组内变异系数低于0.31%,组间变异系数低于0.79%。所建立的方法具有特异性好、灵敏度高、重复性好的优点,可用于牛副结核病的诊断和监测。使用所建立的牛副结核分枝杆菌实时荧光定量PCR方法对收集自新疆地区规模化牛场的85份粪便样品和116份牛乳样品进行检测。结果显示,新疆地区规模化牛场粪便阳性率为9.41%,奶样阳性率为5.17%,表明本地区奶牛养殖场存在一定程度的副结核分枝杆菌感染,需引起相关部门的重视。

• 单位
  中国动物卫生与流行病学中心; 新疆农业大学; 中国兽医药品监察所; 山东农业大学