委陵菜酸对幽门螺杆菌诱导GES-1细胞损伤的保护作用

作者：贺海波; 朱丽金; 贺君宇; 江伟杰; 王晓; 彭校; 陈烨韬; 宋利华; 张继红; 邹坤

来源：中草药, 2021, 52(16): 4892-4903.

DOI：10.7501/j.issn.0253-2670.2021.16.014

• 委陵菜酸
• GES-1细胞
• 幽门螺杆菌
• 炎性反应
• NLRP3炎症小体激活
• 线粒体功能

目的探索委陵菜酸对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的影响。方法 GES-1细胞与Hp共培养,给予委陵菜酸和NOD样受体家族3 (NOD-like receptor family 3,NLRP3)抑制剂MCC950,考察各组细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率、集落形成、凋亡率、线粒体膜电位和活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)变化;采用ELISA法检测各组细胞上清液中单核细胞趋化蛋白-1 (monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)、角质细胞趋化因子(keratinocyte chemokines,KC)、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-Iβ (interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-18、IL-4和IL-10水平;采用试剂盒检测各组细胞谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用 qRT-PCR 检测各组细胞 Toll 样受体 4 (toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子 88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、Bcl-2、Bcl-xl、Bax和BadmRNA表达情况;采用 Western blotting 法检测各组细胞TLR4/NLRP3/核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)和线粒体凋亡信号通路相关蛋白表达情况。结果委陵菜酸显著抑制Hp诱导的GES-1细胞LDH释放率(P<0.05、0.01),促进细胞集落形成(P<0.05、0.01),抑制细胞凋亡(P<0.05、0.01);升高细胞线粒体膜电位(P<0.01),降低ROS水平(P<0.01);降低上清液中MCP-1、KC、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18水平(P<0.01),升高IL-4和IL-10水平(P<0.01);升高细胞GSH-Px、SOD和CAT活性(P<0.01),降低MDA含量(P<0.01);降低细胞TLR4、MyD88、Bax、Bad mRNA表达水平(P<0.01),升高Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达水平和Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bad (P<0.01);下调细胞 TLR4、MyD88、磷酸化 IκB激酶β (phosphorylated inhibitor kappa B kinase β,p-IKKβ)、p-IκBα、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1 前体(pro-Caspase-1)、Caspase-1、硫氧还蛋白互作蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)、pro-IL-lβ、pro-IL-18、Bax、Bad、细胞色素 C、凋亡酶激活因子-1 (apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)、剪切型 Caspase-9 (cleaved Caspase-9)、cleaved Caspase-3 和胞核 p65 蛋白表达水平(P<0.01),上调 Bcl-2、Bcl-xl、pro-Caspase-9、pro-Caspase-3 和胞质 p65 蛋白表达水平(P<0.01)。结论委陵菜酸对Hp诱导的GES-1细胞损伤具有明显保护作用,其作用机制可能与增强内源性抗氧化系统功能、抑制氧化应激、炎性反应及TLR4/NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路激活,从而减少线粒体介导的凋亡密切相关。