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摘要
目的利用不同剂量γ线分别照射Folliculin(FLCN)缺失或下调的肾癌细胞与高表达FLCN的肾癌细胞,探讨FLCN蛋白对肾癌细胞γ线放射敏感性的影响,并进一步探讨联合应用自噬激活剂和γ线放射治疗BHD伴发肾癌的有效性和可行性。方法利用克隆存活分析实验测定细胞对γ线照射的敏感性,利用TUNEL法测定细胞凋亡,利用GFP-LC3荧光分析以及LC3蛋白印迹分析方法检测细胞自噬,并在抑制或激活细胞自噬后,通过克隆存活分析实验比较自噬改变后细胞的生存指数曲线。利用Western blot检测ERK信号通路的关键蛋白ERK/P-ERK,以及自噬调节蛋白Bceclin 1。结果克隆存活分析实验结果显示,无FLCN表达的UOK257肾癌细胞对γ线放射较敏感。GFP-LC3荧光分析以及LC3蛋白Western blot结果显示,相对于高表达FLCN的细胞,γ线放射可以在FLCN缺失或下调的肾癌细胞中诱导更明显的自噬反应。克隆存活分析实验结果显示,应用自噬诱导剂雷帕霉素可以增强γ线放射对UOK257和ACHN 5968细胞的杀伤作用。结论 FLCN蛋白可以降低肾癌细胞对γ线放射的敏感性,同时增加γ线放射在肾癌细胞内诱导的凋亡。相对于高表达FLCN的细胞,γ线放射可以在FLCN缺失或下调的肾癌细胞中激活ERK信号通路并上调Beclin-1蛋白从而诱导更明显的自噬反应。联合应用自噬激活剂和γ线放射可能成为治疗BHD伴发肾癌的潜在有效途径。
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