一例复合杂合突变导致遗传性凝血因子Ⅺ缺陷症患者的表型与遗传学分析

作者：郑晓勇; 金艳慧; 夏慧南; 杨丽红; 朱丽青; 罗莎莎; 刘斯奇; 王明山^*

来源：中国优生与遗传杂志, 2021, 29(10): 1471-1474.

DOI：10.13404/j.cnki.cjbhh.20211207.016

• 凝血因子Ⅺ
• 基因缺陷
• 复合杂合突变
• 分子机制

目的对1例遗传性凝血因子Ⅺ(FⅪ)缺陷症患者进行凝血指标与基因水平的分析,初步探讨其分子发病机制。方法用ELISA方法检测FⅪ抗原(FⅪ:Ag),用一期凝固法检测活化部分凝血活酶时间(APTT)、FⅪ活性(FⅪ:C)等相关凝血指标,并进行表型诊断。用Sanger测序法分析先证者F11基因所有外显子、侧翼序列、5′和3′端非翻译区及家系成员相应的突变区域DNA。用多重序列对比软件ClustaX-2.1-win分析突变位点的序列保守性;用MutationTaster、PolyPhen-2、PROVEAN和SIFT在线生物信息学软件评价突变的危害性;用Swiss-PdbViewer软件分析氨基酸突变后FⅪ蛋白空间构象和次级键的改变。结果先证者活化部分凝血活酶时间(APTT)延长为84.7 s(参考范围:29.0～43.0 s),FⅪ:C和FⅪ:Ag分别降低为3%和1.6%;大儿子、二女儿、大孙子、二外孙女APTT均稍延长,FⅪ:C、FⅪ:Ag均有所降低,为正常对照的50%左右。测序发现先证者F11基因存在第8号外显子c.841C>T(p.Gln263stop)杂合无义突变和第13号外显子c.1546G>A(p.Val498Met)杂合错义突变;其大儿子和大孙子存在p.Val498Met杂合错义突变,二女儿和二外孙女存在p.Gln263Stop杂合无义突变。保守性分析表明Val498在同源物种间高度保守,Gln263在同源物种间中等保守;Mutation Taster评分结果显示p.Gln263stop和p.Val498Met的结果分别为1.000分和0.998分,预示突变为有害突变,可引起疾病;PolyPhen-2、PROVEAN和SIFT评估p.Val498Met的结果分别为1.00、–2.09、0.001,表明突变对蛋白质正常功能运行有害。p.Val498Met突变蛋白模型显示,突变前Val498与Ala517之间有两条氢键,当突变为Met498后,与Ala517之间的氢键没有变化,但与Pro560及Thr575各增加了一条氢键,并与Thr575形成了空间位阻,破坏了FⅪ蛋白的催化结构域。结论先证者p.Gln263stop和p.Val498Met复合杂合突变是导致其FⅪ缺陷症的分子机制,其中p.Val498Met突变为国内首次报道。

• 单位
  温州医科大学附属第一医院