应用直接重组酶聚合酶扩增技术快速检测烟曲霉菌

作者：王秋平; 黄恩奇; 杨银梅; 钟志敏; 陈斌^*

来源：中华医院感染学杂志, 2018, 28(24): 3734-3737.

• 重组酶聚合酶扩增技术
• 烟曲霉菌
• DNA提取
• 快速检测

目的通过建立重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)直接检测标准烟曲霉菌株的方法,探讨其无需样本前处理的可行性。方法针对标准烟曲霉核酸序列保守区域设计RPA扩增引物,使用100、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5麦氏浊度的标准烟曲霉菌液作为无样本前处理组进行直接RPA扩增;同时,分别采用柱式法、磁珠法、氯化苄法提取烟曲霉菌DNA作为样本前处理对照组并进行RPA扩增,最后,应用2%琼脂糖凝胶电泳对产物进行分析。结果标准烟曲霉菌的100、10-1、10-2及10-3麦氏浊度均可于39℃30min内扩增出目的条带;三种提取方法结果分别为:柱氏法(13.8±0.83)ng/μl,磁珠法(11.5±2.25)ng/μl,氯化苄法(64.9±1.31)ng/μl,三种方法均能扩增出目的条带,其中氯化苄法产出率较高(64.9±1.31)ng/μl。结论 RPA可以扩增出未经前处理(核酸提取)的样本,具有快速简便的优点,为检测烟曲霉菌提供了一个有效的工具。

• 单位
  广州医科大学; 南华大学附属第一医院; 广州市第一人民医院