人组织因子的密码子优化及其在毕赤酵母中的高水平发酵制备

作者：钊倩倩; 张秀华; 刘飞

来源：药物生物技术, 2021, 28(01): 1-5.

DOI：10.19526/j.cnki.1005-8915.20210101

• 人组织因子
• 密码子优化
• pGAPZaA载体
• 毕赤酵母
• 重组表达
• 发酵

优化人组织因子编码序列利用毕赤酵母表达系统高水平发酵制备重组人组织因子。将人组织因子胞外活性区(hTF219)编码序列进行密码子偏爱性、GC含量及富AT区的优化,优化序列电转入毕赤酵母表达系统;利用博莱霉素(Zeocin)梯度抗性平板筛选出高表达转化子;在1L发酵罐中采用混合碳源连续补料方式发酵制备重组蛋白。替换hTF219编码cDNA的165个碱基,获得的优化序列与原始序列的相似性为75%;在Zeocin浓度为500μg/mL的YPD平板上筛选得到高表达转化子tfPP-502,该重组菌株以组成型方式分泌表达重组人组织因子,在1L发酵罐中发酵110 h胞外总蛋白含量为6.27 g/L,目的蛋白占比约80%。在毕赤酵母表达系统中实现了重组人组织因子的高水平发酵制备获得的重组菌株可用于重组人组织因子的大规模发酵制备。

• 单位
  济南市中心医院; 山东省药学科学院; 山东大学