猪瘟病毒PCR-ELISA检测方法的初步应用

作者：王利平; 金前跃; 刘兴友; 王选年; 谭东鹤; 李鹏^*

来源：家畜生态学报, 2023, 44(07): 64-71.

• 猪瘟病毒
• PCR-ELISA
• 荧光定量PCR
• 间接免疫荧光

猪瘟(classical swine fever, CSF)是危害猪健康的重要传染病之一，具有急性、热性和高度接触性等特性，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。PCR-ELISA检测方法是在PCR和ELISA基础上创新的一种新技术，其灵敏性和准确性都高于单纯的PCR检测和ELISA检测。根据GenBank中猪瘟石门株序列，设计特异性引物，分别在5’端标记生物素和地高辛，经过PCR扩增后，加入到包被有链霉亲和素的ELISA反应板上，然后通过DIG-HRP抗体进行显色反应，建立PCR-ELISA检测方法。结果表明：PCR-ELISA最低检测到1.81×104拷贝/μL,普通PCR最低检测到1.81×106拷贝/μL,因此PCR-ELISA灵敏性比普通PCR高约100倍；对27份未知样品进行检测，普通PCR检测出阳性样品15份，阳性率为55.5%,PCR-ELISA检出20份阳性样品，阴性7份，阳性率为74%,阳性检出率增加18.5%;用建立的Real-Time PCR进行验证，检测结果与PCR-ELISA一致，两者的符合度为100%;然后用PK15细胞对普通PCR未检测出的阳性样品进行病毒分离培养，通过间接免疫荧光(IFA)及普通PCR检测，结果显示该5份样品均为阳性。说明本研究所建立的PCR-ELISA方法具有灵敏、特异、准确、快速、安全等优势，可应用于CSFV的快速诊断，为CSFV的流行病学监测提供有力保障。

• 单位
  新乡学院; 河南省农业科学院