黄曲霉毒素B1核酸适配体筛选和检测方法的建立

作者：张敏; 张先舟; 李聪; 高浩; 刘健慧; 田益玲; 马雯; 李英军; 檀建新^*

来源：食品科学, 2020, 41(24): 295-303.

• 黄曲霉毒素B1
• 核酸适配体
• 指数富集的配体系统进化技术
• 比色检测
• 纳米金

建立一种高灵敏的快速检测黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的方法。基于氧化石墨烯(graphene oxide,GO)通过π-π共轭吸附单链寡核苷酸(single-strand DNA,ssDNA),对已结合靶标的ssDNA吸附能力较弱的特性,设计针对AFB1核酸适配体的筛选方案。经过10轮筛选,共获得45条ssDNA序列。挑选具有代表性的6条序列进行亲和力分析实验,其解离常数Kd分别为16.29、27.88、18.54、23.11、47.94、22.31 nmol/L。选用亲和力较高的AFB-5、AFB-8进行特异性实验,结果显示所筛选的适配体能特异性吸附AFB1。最后利用适配体AFB-8作为识别元件建立了基于纳米金比色检测AFB1的方法。在优化的检测条件下,AFB1质量浓度与A520 nm值有良好的线性关系,其回归方程为y=-0.007 09x+0.461 42(R2=0.997 9),线性范围为0.025～10 ng/mL,检出限为0.025 ng/mL。通过特异性实验和对大米样品加标回收实验,加标回收率为83.36%～105.74%,证明本方法的可行性。

• 单位
  河北农业大学