人hBD-2-haFGF融合基因原核表达的响应面优化

作者：刘文彬^*; 吴丽蓉; 汪洁; 李小波; 植奇升

来源：基因组学与应用生物学, 2020, 39(08): 3681-3687.

DOI：10.13417/j.gab.039.003681

• 人防御素-2-酸性成纤维因子融合蛋白
• 响应面分析
• 原核表达

HBD-2-haFGF是一种具有痤疮治疗作用的新型融合蛋白。为提高重组大肠埃希菌Escherichia coli BL21 (DE3)/pET-21b-hBD-2-haFGF中hBD-2-haFGF基因的表达水平,本研究尝试优化其诱导表达条件。分别选取IPTG浓度、诱导温度、培养基pH和诱导时间进行单因素试验,在此基础上设计4因素3水平响应面实验,以蛋白表达量作为考察指标。经过响应面分析,响应面二次回归方程为y=55.33-1.59A+0.754B+0.26C+6.33D-0.56AB+5.42AC+9.66AD-2.12BC-0.93BD-2.84CD-4.73A2-8.11B2-1.74C2-4.33D2。BL21(DE3)/pET-21b-hBD-2-haFGF的最优表达条件为:诱导温度39.52℃,IPTG浓度0.60 mmol/L,pH值7.95,时间3 h,预期灰度值为62.893。通过本研究可为进一步大量诱导制备、纯化hBD-2-haFGF蛋白提供技术支持。

• 单位
  广州新海医院; 广东药科大学