蜜蜂幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因的原核表达及多克隆抗体的制备

作者：葛婷; 何晓杰; 叶尔保勒; 阿斯喀·夏热甫汉; 雷程红; 王振宝

来源：动物医学进展, 2018, 39(05): 49-54.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2018.05.009

• 蜜蜂幼虫芽胞杆菌
• 金属蛋白酶基因
• 原核表达
• 多克隆抗体

克隆蜜蜂幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因PLMP,构建其原核表达载体后进行重组蛋白的表达及纯化,接种公兔制备多克隆抗体,以期为研究幼虫芽胞杆菌快速检测方法奠定基础。用PCR方法扩增幼虫芽胞杆菌PLMP基因,扩增产物克隆至表达载体pGEX-4T-1并转化至E.coliBL21(DE3)感受态中。经不同的诱导时间、IPTG浓度诱导表达PLMP重组蛋白,经SDS-PAGE电泳切胶回收纯化目的蛋白。用目的蛋白对公兔进行4次免疫后,采集血清制备多抗。PCR扩增得到1 242bp的PLMP基因片段;构建原核表达载体pGEX-4T-1-PLMP,经终浓度0.8mmol/L IPTG、37℃诱导表达5h得到分子质量为70ku目的蛋白;用目的蛋白免疫公兔得到的多抗经间接ELISA检测效价达到1∶12 800,Western blot检测出现条带,证明所制备的多抗能够用于PLMP抗原的检测。研究结果构建了表达幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因PLMP的原核载体,获得了PLMP蛋白,制备了兔抗PLMP多克隆抗体,为建立幼虫芽胞杆菌快速检测方法奠定了基础。

• 单位
  伊犁职业技术学院; 伊犁出入境检验检疫局; 新疆农业大学