人肝再生增强因子基因慢病毒表达载体的构建与鉴定

作者：薛峰; 王伯庆; 尹继炜; 易超

来源：成都医学院学报, 2015, 10(04): 393-409.

• 肝再生增强因子
• 慢病毒表达载体
• BLR 3A大鼠肝细胞
• 基因重组技术

目的构建携带人肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)基因的慢病毒表达载体,并验证其安全性与有效性。方法将以人胎肝cDNA为模板扩增得到的ALR与pLenti6/V5-D-TOPO重组慢病毒载体连接后,与慢病毒包装体系ViraPowerTMPackaging Mix共转染293T细胞,得到携带人ALR基因的慢病毒表达载体病毒颗粒,实时定量PCR法测定病毒滴度;转染BLR 3A大鼠肝细胞,观察细胞生长情况,并用RT-PCR法测定ALR基因表达的方法,验证构建的慢病毒载体的安全性与有效性。结果扩增产物凝胶电泳、提抽质粒酶切电泳及基因测序结果均显示成功构建携带ALR基因的慢病毒表达载体,测得其病毒滴度为1.48×107 v.p./mL。转染BLR 3A大鼠肝细胞72h后,仅少量细胞病变脱离,转染率为88.49%;RT-PCR结果显示,构建的携带ALR慢病毒表达载体可诱导BLR 3A大鼠肝细胞表达ALR基因。结论慢病毒表达载体是一种兼具有效性与安全性,且适用于基因研究的病毒表达载体。

• 单位
  新疆医科大学附属肿瘤医院