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摘要
目的:通过构建人E2F-1基因的小干扰RNA(siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1基因表达的影响。方法:将设计合成的具有短发夹结构的人E2F-1基因siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后的pSilencer4·1-CMVneo表达质粒,并做酶切及测序鉴定。用脂质体把重组质粒转染至细胞,采用实时定量PCR(real-time quantitativePCR)及蛋白印迹(western blotting)技术分别检测E2F-1mRNA及蛋白表达。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建了E2F-1 siRNA表达质粒;它可显著抑制MGC803细胞中E2F-1基因mRNA及蛋白表达,与未转染组及阴性对照组细胞比较,分别降低了86·4%、86·1%和81·5%、79·6%。结论:pSilencer4·1-E2F-1重组质粒能抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1基因的表达,为进一步E2F-1基因的功能研究及胃癌治疗研究提供了实验基础。
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