基于TCID50检测AAV9载体制品感染性滴度的方法

作者：王聪; 李秀; 牛苗; 戴阳光; 董哲岳; 董小岩; 余双庆^*; 杨怡姝

来源：中国生物工程杂志, 2021, 41(10): 28-32.

DOI：10.13523/j.cb.2106006

• 9型腺相关病毒载体
• 感染性滴度
• 半数组织培养感染剂量

目的:建立一种基于半数组织培养感染剂量(median tissue culture infective dose,TCID50)检测9型腺相关病毒(adeno-associated virus type 9,AAV9)载体制品感染性滴度的方法。方法:利用含AAV2 rep和cap基因的1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type1,HSV1)做为辅助病毒与梯度稀释的AAV9载体制品共同感染HEK-293细胞,培养48 h后用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)扩增AAV特异性反向末端重复序列(inverted terminal repeats,ITR),根据阳性及阴性感染孔数,利用Krber法计算样品的TCID50。结果:采用携带增强绿色荧光蛋白报告基因的AAV9载体制品确定辅助病毒HSV1-rc最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为5,AAV9-101的感染性滴度为1.6×109TCID50/m L。结论:对AAV9载体制品进行感染性滴度检测,且具有可重复性。

• 单位
  北京工业大学