HPLC-MS/MS法快速测定儿童微量血浆中甲氨蝶呤和丙戊酸浓度

作者：姜锡娟; 秦亚彬; 张古英; 赵德运^*; 孙玉林

来源：中南药学, 2023, 21(08): 2101-2105.

• 甲氨蝶呤
• 丙戊酸
• 高效液相色谱串联质谱
• 治疗药物监测
• 儿科患者

目的 建立高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法快速测定儿童微量血浆中甲氨蝶呤(MTX)和丙戊酸(VPA)的浓度。方法 10μL血浆经甲醇沉淀蛋白后取上清液直接进样分析，内标为MTX-D3和VPA-D6；采用Phenomenex Kinetex C18柱(50 mm×2.1 mm,5μm)分离，以水(含0.01%甲酸)和甲醇为流动相，梯度洗脱，进样量5μL，流速0.5 m L·min-1，分析时长2.4 min。电喷雾离子源(ESI)正负离子切换扫描下，采用多反应监测(MRM)模式进行质谱分析，用于定量分析的离子对分别为m/z 455.1→308.2(MTX),143.2→143.2(VPA),458.1→311.1(MTX-D3)和149.2→149.2(VPA-D6)。结果 MTX在31.25～2000 ng·m L-1内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9995)，定量下限为31.25 ng·m L-1;VPA在1.88～120μg·m L-1内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9992)，定量下限为1.88μg·m L-1；批内、批间准确度在98.05%～104.89%，批内、批间精密度的变异系数(CV)均≤6.73%，平均提取回收率为90.21%～100.55%，基质效应为93.22%～102.73%，溶血效应(溶血程度≤5%)不影响测定结果，血浆样品可分别在冻融3次、室温(25℃)24 h、4℃进样器12 h和冷冻(-20℃)30 d等条件下稳定保存；该法成功用于169例临床患儿血浆样本分析。结论 本方法所需样本量小，快速、准确、灵敏、稳定，且不受溶血效应影响(溶血程度≤5%)，可应用于儿童MTX和VPA治疗药物监测及联合用药研究。

• 单位
  河北省儿童医院