何首乌醇提物对人正常肝细胞L02的毒性作用及其机制

作者：鲍依琪; 沈芳; 李杨蕾; 陈冬铭; 陆红^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2020, 26(10): 23-28.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20201022

• 何首乌
• 肝脏毒性
• 细胞凋亡
• 活性氧
• 线粒体途径

目的:探究何首乌醇提物(PME)对人正常肝细胞L02的毒性损伤和作用机制,为何首乌合理安全用药提供依据。方法:以PME(5,10,20 g·L-1)作用于L02细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性; Hoechst 33342染色法观察细胞核形态; Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡率;相关试剂盒检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)释放率、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量; JC-1法检测细胞线粒体膜电位(MMP)变化;流式细胞术检测活性氧(ROS)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9前体(pro Caspase-9)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3前体(pro Caspase-3)的表达水平。结果:与空白组比较,L02细胞在PME作用下存活率下降,呈时间浓度依赖性; Hoechst 33342染色后荧光下可见细胞核皱缩,碎裂,染色质凝集; Annexin V-FITC/PI双染法结果表明PME20 g·L-1组凋亡率上升; PME 20 g·L-1组LDH释放率显著增加(P <0. 01),细胞内ROS水平显著上升(P <0. 01),SOD活力显著下降(P <0. 01),PME 5,10,20 g·L-1组MMP明显降低(P <0. 05)。与空白组比较,随着PME给药组浓度增加,PME 10,20 g·L-1组pro Caspase-3,pro Caspase-9蛋白表达水平均显著降低(P <0. 01),PME 5,10,20 g·L-1组Bax蛋白表达水平明显升高(P <0. 01),PME 20 g·L-1组Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P <0. 05)。结论:PME对L02细胞存在毒性损伤作用,可一定程度破坏肝细胞的结构,促进ROS水平升高,诱导氧化应激,激活线粒体途径,活化凋亡通路相关蛋白引起肝细胞损伤,提示ROS介导的线粒体通路参与了PME诱导肝细胞凋亡的过程。

• 单位
  浙江中医药大学