抗松针褐斑病湿地松胚性愈伤组织的超低温保存

作者：杨帆; 夏馨蕊; 沈李元; 叶建仁; 朱丽华^*

来源：分子植物育种, 2020, 18(15): 5097-5105.

DOI：10.13271/j.mpb.018.005097

• 湿地松(Pinus elliottii)
• 胚性愈伤组织
• 超低温保存

本实验以抗松针褐斑病湿地松胚性愈伤组织27-1为材料,运用正交实验方法探究其超低温冷冻保存方法。结果表明:预培养时间、二甲基亚砜(DMSO)浓度、蔗糖浓度、聚乙二醇(PEG) 8000浓度和解冻温度对解冻后愈伤组织的活性均有显著影响。结合解冻后愈伤组织活力及其恢复生长情况,得出效果较好的超低温保存方法为:继代培养10～12 d生长状态良好的愈伤组织,添加0.5 mol/L蔗糖的高渗培养基预培养36 h;5%DMSO,15%PEG 4000,0.5 mol/L蔗糖3种冷冻保护剂组合使用,程序降温至-80℃停留30 min后投入液氮罐中保存;32℃水浴解冻,蔗糖溶液清洗后转接至LP培养基上恢复生长。在此程序处理下,冷冻90 d的愈伤组织1个月后可恢复再生,再生率最高达100%,再生愈伤组织生长状态良好并依然保持分化成熟体胚的能力。

• 单位
  南京林业大学; 南方现代林业协同创新中心