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摘要
通过比较美洲锥虫和非洲锥虫基因组的保守性与特异性,设计2套锥虫特异性引物和探针用于核酸检测,美洲锥虫和非洲锥虫分别使用HEX和FAM荧光基团标记探针,建立美洲锥虫和非洲锥虫的双重实时荧光PCR检测方法,并对建立的方法进行灵敏度、特异性和重复性分析。结果显示,新建立的双重实时荧光PCR检测方法只对2种锥虫阳性对照模板有特异性扩增,与健康人血液、健康人尿液、钩端螺旋体、丝虫阳性对照样本均无交叉反应。2套引物和探针的检测灵敏度均可达到最低10-4拷贝/mL。美洲锥虫和非洲锥虫阳性对照模板的2种稀释度重复检测10次均有较好的重复性。结果表明,建立的2种锥虫双重实时荧光PCR检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,可用于对我国口岸输入性锥虫病例的早期检测和分型鉴别。
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