Notch信号通路抑制剂调控鼠Müller细胞来源的干细胞向神经节细胞分化的研究

作者：宋伟涛; 张雪咏; 熊思齐; 蒋剑; 文丹; 喻一心; 夏晓波

来源：中华眼底病杂志, 2014, 30(04): 395-398.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2014.04.015

• 小神经胶质细胞
• 视网膜神经节细胞
• 干细胞
• 受体,Notch
• 动物实验

目的观察Notch信号通路抑制剂对鼠Müller细胞来源的视网膜干细胞的调控作用。方法Sprague Dawley大鼠20只,鼠龄1020d。显微镜下分离视网膜,采用反复不完全胰蛋白酶消化法传代培养。取传代3次的细胞用于实验。Müller细胞诱导去分化,荧光显微镜下观察细胞增生状态,免疫荧光细胞化学染色,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测视网膜干细胞特异性表达产物巢蛋白(Nestin)、Ki-67的表达;5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(Edu)染色检测细胞核阳性率。视网膜干细胞随机分为Notch信号通路γ分泌酶抑制剂(GSI)干预组(GSI组)和对照组,采用免疫荧光染色方法统计分析神经节细胞的比例变化。结果荧光显微镜观察结果显示,去分化培养细胞增生聚集成球。免疫荧光细胞化学染色结果显示,Nestin、Ki-67表达率分别为(92.94±6.48)%、(85.96±6.04)%。细胞核Edu阳性率为(82.80±6.65)%。RT-PCR、Western blot检测结果显示,神经球中Nestin、Ki-67mRNA、蛋白均呈高表达,纯化后的Müller细胞中无表达。GSI组、对照组神经节细胞阳性率分别为(16.98±2.87)%、(11.17±0.71)%。两组细胞阳性率比较,差异有统计学意义(t=3.210,P=0.002)。结论 Notch信号通路是视网膜干细胞向神经节细胞分化过程中重要的调控基因。

• 单位
  中南大学湘雅医院