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摘要
为系统研究草鱼I型干扰素的合成、分泌和免疫功能，本实验在大肠杆菌中表达并提纯了草鱼IFNa (Ci IFNa)和IFNd (Ci IFNd)重组蛋白。将Ci IFNa和Ci IFNd成熟肽分别克隆到pET-21d或pEHISTEVb表达载体上，并转化到大肠杆菌中；IPTG诱导表达获得Ci IFNa和Ci IFNd成熟肽的包涵体，经盐酸胍变性、蛋白复性和浓缩后，利用分子筛层析获得了纯度较高的重组蛋白。用重组蛋白免疫小鼠，通过PEG法诱导得到杂交瘤细胞；将稳定分泌抗体的阳性细胞株细胞悬液注射入小鼠腹腔，制备腹水抗体并进行纯化。本实验纯化了草鱼Ci IFNa和Ci IFNd各2株抗体，并采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、蛋白质印迹法(Western blot)和免疫荧光法对其进行了较全面的鉴定。实验表明，Ci IFNa和Ci IFNd单克隆抗体特异性好、效价高，能够特异识别在大肠杆菌和真核细胞中表达的重组蛋白，且不存在Ci IFNa和Ci IFNd分子间的交叉识别。本研究制备的单克隆抗体为深入研究草鱼干扰素的细胞来源和蛋白表达规律奠定基础。
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