猪δ冠状病毒S1-CTD的截短表达及间接ELISA抗体方法的建立

作者：瞿欢; 李成; 陈汭; 廖艺杰; 曹三杰; 文翼平; 颜其贵; 黄小波^*

来源：生物技术通报, 2021, 37(05): 273-280.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-1181

• 猪丁型冠状病毒
• S1-CTD蛋白
• 原核表达
• 间接ELISA

猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种能引起仔猪呕吐、腹泻和脱水的新的猪肠道冠状病毒,表达了PDCoV的S基因抗原表位区(S1-CTD)并建立了检测抗体的间接ELISA方法。根据S基因序列设计引物,扩增含中和抗原表位的S1-CTD区(位于S基因的832-1 848 bp),构建原核表达载体pET28a-S1-CTD,表达的重组S1-CTD蛋白经SDS-PAGE鉴定大小约41 kD,Western Blot证明其有良好的反应原性。以重组S1-CTD 蛋白为抗原建立间接ELISA,抗原最佳包被浓度为1μg/孔,待检血清的最佳稀释度为1∶50,阴阳性临界值为OD450nm≥0.377。该ELISA检测其他8种常见猪病阳性血清无交叉反应,特异性好;批内和批间变异系数均小于10%,重复性好。ELISA与病毒中和试验的总符合率达83.3%。用建立的ELISA检测了2012-2017年四川部分猪场490份临床血清,结果显示血清中PDCoV抗体阳性率为49.18%。

• 单位
  四川农业大学