稳定表达人ACE2的Huh-7细胞系的建立及应用

作者：郎巧利; 黄楠; 李莉萍; 杨希; 刘春麟^*

来源：生命科学研究, 2023, 27(03): 189-195.

DOI：10.16605/j.cnki.1007-7847.2022.07.0177

• 严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)
• 人血管紧张素转换酶2(hACE2)
• Huh-7细胞
• 慢病毒感染
• 稳定转染细胞系
• 治疗性抗体

为了构建稳定表达人血管紧张素转换酶2(human angiotensin converting enzyme 2, hACE2)的Huh-7细胞系,本研究构建了不带荧光的pWPXL-neo-hACE2慢病毒载体,并利用psPAX2和pMD2.G-VSVG共同转染HEK293T细胞获得慢病毒;将包装好的慢病毒感染Huh-7细胞后,利用潮霉素B筛选获得可表达hACE2的Huh-7细胞;通过间接免疫荧光法和蛋白质印迹法检测Huh-7细胞中hACE2蛋白的表达;采用流式细胞术分析Huh-7-hACE2细胞与严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARSCoV-2)刺突(spike, S)蛋白受体结合结构域(receptor-binding domain, RBD)的结合情况,并用SARS-CoV-2假病毒进一步测定Huh-7-hACE2细胞对SARS-CoV-2的易感性,最后利用鉴定过的Huh-7-hACE2细胞测定SARS-CoV-2中和抗体REGN10987对假病毒的中和效价。结果显示, hACE2蛋白在Huh-7细胞中成功表达,且表达的hACE2蛋白能与SARS-CoV-2 S蛋白RBD结合;相较于Huh-7细胞, Huh-7-hACE2细胞对假病毒的易感性显著提高,且假病毒中和效价测定结果与文献报道的真病毒中和效价相似。总之,本研究成功构建了稳定表达hACE2的Huh-7细胞系,并且其能应用于新型冠状病毒感染(corona virus disease 2019, COVID-19)治疗性单抗的活性评价,是研究SARS-CoV-2的致病机制、开发抗病毒药物及疫苗的有利工具。

• 单位
  重庆市畜牧科学院; 重庆医科大学附属第二医院