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摘要
目的确认重组人胰岛素类似物DesB30的结构,分析其生物效价。方法在毕赤酵母中构建表达含有短C肽AAK并去掉B链第30位氨基酸(T)的人胰岛素原类似物HMPIDesB30,经胰蛋白酶酶切纯化获得DesB30。利用N末端氨基酸序列测定,质量肽谱分析,圆二色谱等方法进行结构确认及质量分析。利用RP-HPLC法,小鼠血糖法,脂肪细胞法分析其生物效价。结果 DesB30的N端氨基酸序列、二硫键配对、圆二色谱值与理论值一致,其生物效价与人胰岛素基本一致。结论毕赤酵母分泌表达的胰岛素类似物DesB30结构正确,胰岛素去掉B链第30位的苏氨酸,不影响其生物活性。
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