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摘要
目的为了研究轮状病毒疫苗株VP8*蛋白的功能和结构特征,利用原核表达系统纯化得到VP8*核心区蛋白(VP8*core,64-223位氨基酸)。方法从口服疫苗中提取兰州疫苗株LLR病毒核酸,RT-PCR得到目的片段,克隆到p ET30a载体中构建重组质粒。根据已合成的Rotateq和Rotarix P[8]VP8*全长基因,PCR得到VP8*核心区片段,克隆到p ET30a载体构建重组质粒。重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行蛋白表达。利用HistrapHP和superdex200纯化柱,通过亲和层析和分子筛层析纯化得到目的蛋白。结果 VP8*核心区蛋白以可溶形式表达,并通过纯化得到较纯的VP8*core蛋白,聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)显示相对分子质量约为20 k Da。结论成功构建了p ET30a-VP8*core重组质粒,得到轮状病毒各疫苗株VP8*core蛋白,为研究疫苗株受体结合特征以及疫苗评价提供了基础和参考。
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